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實驗室無菌環境怎樣檢測

作者:admin 發布日期:2020-01-07 關注次數: 二維碼分享

微生物檢測人員天天都需要在無菌室工作,在超凈臺或者生物安全柜里操作,為了保證我們檢測的準確性,我們必須要求無菌室以及工作臺符合要求,那我們應該怎樣進行驗證呢?下面我們內蒙古實驗室系統工程給您介紹一下環境中無菌或殺菌效果應如何檢查。

一、紫外燈殺菌效果檢查:紫外燈在使用過程中輻射強度會逐漸降低,影響其殺菌效果,故應該定期檢查。紫外燈的殺菌有效波長是253.7nm,其強度可以用中心波長254nm的紫外線強度計測定。在沒有紫外線強度計的情況下可以采用生物學替代。

生物學測試簡要步驟如下:選用枯草芽孢桿菌ATCC 9372,制成106CFU/mL~108CFU/mL濃度的菌懸液;選用經脫脂處理的0.5cm×1.0cm大小的布片或鋁片,高壓滅菌后用作載體;每個載體上滴一滴制備好的菌懸液,干燥后備用;將8個染菌載體放于無菌器皿中,置于紫外燈下1m~1.5m處,開啟紫外燈照射,于0.5h、1h、1.5h和2h各取出2個染菌載體,分別投入盛有5mL緩沖蛋白胨水的洗脫液;系列稀釋后進行平板計數;同法取8個染菌載體用做陽性對照,操作除不經紫外此昂照射外與試驗組相同。

殺滅率=(陽性對照回收菌數-試驗組回收菌數)/陽性對照回收菌數×百分之100,殺滅率大于99.9%時,認為紫外燈殺菌效果合格。

二、無菌室空氣質量檢查:無菌室空氣質量檢查應按照采樣計劃,根據情況對處于空態、靜態和正常運行的風險區,使用適當的儀器采集空氣中微生物,測定并監控風險區空氣的微生物污染。空氣懸浮微生物的采樣和計數方法多種多樣,根據多需采樣目的決定具體的采樣方法和采樣器。因采樣器的采集效率不同,應慎重選擇合適的方法和設備。采樣器分為兩類:被動式采樣器,如落菌盤;主動式采樣器,如過濾采樣器、撞擊采樣器、沖擊采樣器等。 


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1.沉降法:落菌盤等被動式空氣微生物采樣器不能測量空氣中的微生物的總數,而是測量空氣中微生物在表面的沉降率。只要確定單位時間落菌盤上微生物的數量,再根據落菌盤的暴露面積與暴露時間之間的關系,即可大致計算出空氣中微生物的數量。面積小于30m2的室內設一條對角線取3點,在其中心以及兩端距墻1m處各取1點;面積大于30m2的室內房間四面距墻1m和中央各放置一個平皿,高度為實驗臺高度。培養基平皿開蓋暴露10min,然后蓋上蓋子倒放,培養48h,計數每個平皿上的菌落數。

日常監控時,可以設定可接受的菌落數限值。一般無菌室所有的取樣平皿上的細菌總數應小于15個。空氣質量良好的無菌室,通常么個平皿上生長的細菌不超過2個。

2.空氣過濾法:空氣采樣除了自然沉降法外,還可以使用專門的主動式采樣器。主動式采樣器可以評估風險區空氣微生物的特征。主動式采樣器主要包括過濾采樣器、撞擊采樣器、沖擊采樣器等。

撞擊采樣器可以分為狹縫式采樣器、離心式采樣器和針孔式采樣器。狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣,通過采樣器的縫隙式平板,將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表面上,附著的活微生物粒子經過培養后形成菌落,予以計數。離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉,氣流從采樣器前部吸入從后部流出,在離心機的作用下,空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養條上,經培養后形成菌落,予以計數。

過濾式空氣采樣器是常用、簡單的空氣采樣器。過濾式采樣器有采樣頭、濾器、流量計和抽氣泵組成。

三、無菌室物體表面微生物污染檢查:表面微生物污染的檢查需要使用接觸器或拭子,獲得某表面某時間點的微生物數量。

接觸器以容器內已知面積的固態培養介質與表面接觸,接觸面積應大于20cm2,均勻用力將整個營養介質壓住表面幾秒鐘,不得移動。然后將裝置放回容器內,再清潔采樣表面,清除殘留營養物。接觸器培養后顯現的菌落可以給出原表面微生物的存活狀況的鏡像“圖”。


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使用拭子更為簡單和靈活,用拭子擦拭某個表面,它抹去的微生物數量就可以計算出了。對接觸裝置觸及不到的、不平或有凹陷的非吸收性大表面,用拭子采樣特別方便。棉拭子的操作方法如下:

準備材料:自制無菌棉拭子或購買商品化的無菌棉拭子、內徑10cm×10cm無菌規格板、無菌生理鹽水、培養基平皿。

如果取樣物體是平面的,將無菌規格板放在物體表面,用浸濕的無菌棉拭子在無菌規格板空心處橫豎涂抹均勻,涂抹時隨之轉動棉拭子,剪去棉拭子與手接觸部分,將棉拭子放入裝有一定體積的無菌生理鹽水中待檢。將采樣管敲打80次以上是棉拭子上的細菌充分擴散,做適當稀釋,進行平板計數,37℃培養48h計數。細菌總數(CFU/cm2)=(平皿上菌落平均數×稀釋倍數)/采樣面積(cm2)

四、人員接觸面無菌檢查:人員與檢測對象的接觸面主要是受被檢人員洗手消毒后,五指并攏。將浸泡過的棉拭子沿雙手指屈從指根到指端往返涂擦兩次,涂擦的同時轉動棉拭子。剪去操作者手接觸部位,將棉拭子放入裝有一定體積的無菌室生理鹽水中待檢。按“無菌室物體表面細菌污染檢查”的方法進行樣品處理、接種、培養、計數和報告結果。


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